۳۸˚ ۱۷’N

۶۱˚ ۱۷’E

۸

۵۱Aau

گچسر(البرز)

aucherii.A

۲n=4x=36

۳۵˚ ۹۵’N

۵۱˚ ۳۰’E

۹

۷۱pA

همدان

chycephalapa A.

۲n=4x=36

۳۵˚ ۴۴’N

۴۹˚ ۲۸’E

۱۰

۱۶AP

گلستان

chycephalapa A.

۲n=4x=36

N^‘30 ˚۳۶

۵۷ ˚۵۳ E

۲-۵- عصاره گیری
به منظور استحصال عصاره از نمونه هایی که در هر فصل از گونه های مختلف برداشت شده و در سایه خشک شده بود. به این صورت انجام گرفت که ابتدا ۲٫۵ گرم از برگ های سایه خشک با نیتروژن مایع به خوبی خرد شد. سپس ۵۰ میلی لیتر متانول ۸۰% بر روی برگ های خرد شده موجود در یک فالکون افزوده شد. فالکون مذکور به مدت ۲۴ ساعت روی شیکر با سرعت rpm90 قرار گرفت. پس از این مدت عصاره ها ۳ بار فیلتر شد تا یک محلول زلال و شفاف به دست آمد. پس از این محلول در دمای C˚۴ قرار داده شد و تست های آزمایشگاهی مربوط به تعیین میزان کل ترکیبات فنولیک و فعالیت آنتی اکسیدانی بر روی آن ها انجام شد.
۲-۶- اندازه گیری کل ترکیبات فنولیک
مقدار کل ترکیبات فنولیک موجود در عصاره این گیاه توسط رنگ سنجی به روش فولین- سیوکالتوکه توسط سینگلتون و راسی]۱۰۲[ تغییر داده شده، مورد بررسی قرار گرفت. مقدار ۵/۰ میلی لیتر از عصاره استخراجی رقیق شده (۱ میلی لیتر عصاره در ۴۹ میلی لیتر متانول ۸۰%) با ۵/۲ میلی لیتر از معرف فولین- سیوکالتو که ۱۰ برابر رقیق شده بود(توسط آب مقطر) و ۲ میلی لیتر از معرف کربنات سدیم ۵/۷ درصد به خوبی مخلوط شد و لوله های آزمایش به مدت ۱۵ دقیقه در حمام بن ماری ۴۵ درجه سانتی گراد قرار داده شد، سپس مقدار جذب محلول توسط دستگاه اسپکتروفتومتری در طول موج ۷۶۵ نانومتر خوانده شد. مخلوطی از واکنشگر به عنوان شاهد استفاده شد. مقدار کل ترکیبات فنولیک با بهره گرفتن از معادله خط رسم شده برای اسید تانیک، بر مبنای اسید تانیک میلی گرم در گرم ماده خشک بیان گردید]۱۰۵[. برای رسم منحنی استاندارد، اسید تانیک در غلظت های ۵/۱۲، ۲۵، ۵۰، ۱۰۰ قسمت در میلیون(در متانول ۸۰ درصد) تهیه شد و مقدار کل ترکیبات فنولیک موجود در آن به روشی که برای عصاره دکر شد تعیین گردید.

فرمول بدست آمده از منحنی استاندارد اسید تانیک:
Y=11/826X+ 0/0077
R²=0/9233
۲-۷- آزمون DPPH^[27]
مقدار ۱/۰ میلی لیتر از عصاره گیاهی یا استاندار مورد نظر (BHT) که در غلظت های ۵۰، ۱۰۰، ۳۰۰ و ۵۰۰ پی پی ام تهیه شده بود درون فالکون ۱۰ میلی لیتری ریخته شد. به فالکون ها ۵ میلی لیتر از محلولDPPH 1/0 میلی مولار (حل شده در متانول ۸۰% ) افزوده گردید. سپس جذب نمونه ها در دستگاه اسپکتوفتومتر Beckman DU530 در طول موج nm 517 به منظور صفر کردن دستگاه از متانول ۸۰% و محلول DPPH استفاده شد. کنترل موجود در این تست شامل ۱/۰ میلی لیتر متانول ۸۰% و ۵ میلی لیتر از محلول DPPH 1/0 میلی مولار(حل شده در متانول ۸۰%) بود]۳۵[. برای گزارش میزان IC₅₀ (در واقع نشان دهنده غلظت یک ترکیب منحصر به فرد برای رفع ۵۰ درصد DPPH است) ابتدا عدد کنترل شامل ۱/۰ میلی لیتر متانول ۸۰% و ۵ میلی لیتر از محلول DPPH 1/0 میلی مولار(حل شده در متانول ۸۰%) جذب آن در دستگاه اسپکتوفتومتر BeckmanDU530 در طول موج nm517 خوانده شده و عدد بدست آمده نصف و در F_(x) بدست آمده از چهار غلظت، قرار داده شد و مقدار x (میزان (IC₅₀ محاسبه گردید]۳۲[.
×۱۰۰   درصد ممانعت کنندگی
۲-۸-اندازه گیری میزان پراکسید هیدروژن(H₂O₂)
ابتدا ۸ غلظت پی پی ام ازH₂O₂ (۰، ۵، ۱۰، ۲۰، ۳۰، ۴۰، ۵۰، ۶۰) آماده شد و با بهره گرفتن از آن منحنی استاندار رسم گردید. سپس ۱ گرم برگ تازه را با ازت مایع پودر شده و ۱۰ میلی لیتر تری کلریک اسید(^[۲۸]TCA) 1/0% مولار به آن اضافه شد، پس از دقائقی آن ها را در فالکون های ۱۰ میلی لیتری انتقال داده و به مدت ۱۵ دقیقه با دور ۱۲۰۰۰ سانتریفوژ شد. سپس ۵/۰ میلی لیتر از قسمت بالای محلول بدست آمده را برداشته و با ۵/۰ میلی لیتر محلول فسفات بافر ۱۰ میلی مولار با pH=7/4( K₂ HPO₄،KH₂ PO₄) مخلوط می گردد. سپس ۱ میلی لیتر محلول KI به آن اضافه شده و به مدت ۱ ساعت در تاریکی قرار داده می شود. هنگاهی که رنگ محلول به رنگ بنفش کم رنگ در آمد آن را در طول موج nm390 قرائت می گردد]۶۹[.
مقدار F_(X)منحنی استاندارد در زیر آمده: